透射電鏡樣品的制備方法很多。其中滴液法，或在滴液法基礎(chǔ)上發(fā)展出來的其他類似方法如直接貼印法、噴霧法等主要被用于觀察病毒粒子細(xì)菌的形態(tài)及生物大分子等。由于生物樣品散射電子的能力很低，所以通常還須采用重金屬鹽染色或金屬噴鍍等方法來增加樣品的反差，提高觀察效果。負(fù)染色法由于操作簡(jiǎn)單，目前在進(jìn)行透射電鏡生物樣品制片時(shí)比較常用。
本實(shí)驗(yàn)將主要介紹采用滴液法結(jié)合負(fù)染色技術(shù)觀察細(xì)菌的形態(tài)。

實(shí)驗(yàn)方法原理	由于生物樣品主要由碳、氫、氧、氮等元素組成，散射電子的能力很低，在電鏡下反差小。所以在進(jìn)行電鏡的生物樣品制備時(shí)通常還須采用重金屬鹽染色或金屬噴鍍等方法來增加樣品的反差，提高觀察效果。負(fù)染色法就是用電子密度高，本身不顯示結(jié)構(gòu)且與樣品幾乎不反應(yīng)的物質(zhì)（如磷鎢酸鈉或磷鎢酸鉀）來對(duì)樣品進(jìn)行「染色」， 由于這些重金屬鹽不被樣品成分所吸附而是沉積到樣品四周，如果樣品具有表面結(jié)構(gòu)，這種物質(zhì)還能穿透進(jìn)表面上凹陷的部分，因面在樣品四周有染液沉積的地方，散射電于的能力強(qiáng)，表現(xiàn)為暗區(qū)，而在有樣品的地方散射電子的能力弱，表現(xiàn)為亮區(qū)。這樣便能把樣品的外形與表面結(jié)構(gòu)清楚地襯托出來。負(fù)染色法由于操作簡(jiǎn)單，目前在進(jìn)行透射電鏡生物樣品制片時(shí)比較常用。
實(shí)驗(yàn)材料	細(xì)菌斜面
試劑、試劑盒	2％的磷鎢酸鈉水溶液
儀器、耗材	無菌毛細(xì)吸管無菌濾紙
實(shí)驗(yàn)步驟	1. 將適量無菌水加入生長(zhǎng)良好的細(xì)菌斜面內(nèi)，用吸管輕輕撥動(dòng)菌體制成菌懸液參用無菌濾紙過濾，并調(diào)整濾液中的細(xì)胞濃度為 108～109 個(gè)/毫升。 2. 取等量的上述菌懸液與等量的 2％ 的磷鎢酸鈉水溶液混合，制成混合菌懸液。 3. 用無菌毛細(xì)吸管吸取混合菌懸液滴在銅網(wǎng)膜上。 4. 經(jīng) 3～5 min 后，用濾紙吸去余水，待樣品干燥后，置低倍光學(xué)顯微鏡下檢查，挑選膜完整、菌體分布均勻的銅網(wǎng)。 有時(shí)為了保持菌體的原有形狀，常用戊二醛、甲醛、鋨酸蒸氣等試劑小心固定后再進(jìn)行染色。